层析介质
层析是“色层分析”的简称,是一种利用各组分物理性质不同,将多组分混合物进行分离及测定的方法。简一生物通过与博格隆(上海)生物技术有限公司合作,为客户提供优质的产品和服务,包括凝胶过滤介质,离子交换介质,疏水作用介质,亲和层析介质等。
凝胶过滤介质:
凝胶过滤是一种根据生物分子的大小及形状来分离物质的一种层析方法,凝胶过滤介质为多孔的网状结构,生物分子越小进入介质内部越深,在介质中停留时间越长。每种介质的孔径都有一定的范围,所以选择凝胶过滤介质关键在于选择合适的分离范围,其次要考虑介质的机械性能和可放大性。
凝胶过滤层析特点:
—非吸附方法、容易操作、仅需一种缓冲液
凝胶过滤层析分类及各自特点:
—组分离(脱盐/交换缓冲液);上样体积可达柱体积30%。
—精细分离(聚集体去除,分离不同大小分子量的蛋白);上样体积0.5-4%,柱床高度高于60cm。
产品系列 | 产品名称 |
Bestdex系列 (葡聚糖凝胶过滤介质) |
Bestdex G-10 |
Bestdex G-15 | |
Bestdex G-25 | |
Bestdex G-50 | |
Bestdex G-75 | |
Bestdex LH-20 | |
Bestarose Fast Flow 系列 | Bestarose 4 Fast Flow |
Bestarose 6 Fast Flow | |
Chromdex prep grade系列 | Chromdex 30 prep grade |
Chromdex 75 prep grade | |
Chromdex 200 prep grade | |
Bestarose/Bestarose CL系列 (琼脂糖凝胶介质) |
Bestarose 4B |
Bestarose 6B | |
Bestarose CL 4B | |
Bestarose CL 6B |
离子交换介质:
离子交换层析是根据不同生物分子所带电荷性和数量的差异来分离的一种层析技术。由于生物分子大都带有酸性基团或碱性基团,并且可以通过调节缓冲液的pH改变带电性质和数量,生物分子与带相反电荷的阴离子交换介质或者阳离子交换介质相结合后,采用改变流动相中的离子强度或者pH,让结合弱的先洗脱下来,结合强的后洗脱下来,从而达到分离纯化的目的。
离子交换层析特点:
—良好的可操控性、高选择性、高载量、高回收率、良好的物理和化学稳定性、简单的在位清洗
离子交换介质分类及各自特点:
—离子交换介质由基架和功能基团两部分组成,根据功能基团的带电荷性质分为阳离子交换和阴离子交换,根据其在溶液中的店里情况分为强离子交换基团和弱离子交换基团。
—离子交换基团的类型和密度决定了介质的选择性和载量。基架的性质决定了介质的分辨率和机械性能。
产品系列 | 产品名称 |
Bestarose Fast Flow(强离子) | Q Bestarose Fast Flow |
SP Bestarose Fast Flow | |
Bestarose Fast Flow(弱离子) | DEAE Bestarose Fast Flow |
CM Bestarose Fast Flow | |
Bestarose XL IEX | Q Bestarose XL |
SP Bestarose XL | |
Bestarose High Performance | Q Bestarose High Performance |
SP Bestarose High Performance | |
Diamond | Diamond Q |
Diamond DEAE | |
Diamond MMC | Diamond MMC |
MMC Bestarose 6FF | |
Diamond Mix-A | Diamond Mix-A/Diamond MIX-A Mustang XL |
Diamond Mustang | Diamond Q Mustang/Diamond Q Mustang XL |
Diamond SP Mustang/Diamond SP Mustang XL | |
Diamond MMC Mustang | Diamond MIX-A Mustang/Diamond MMC Mustang |
Bestdex | CM Bestdex C-25/DEAE Bestdex A-50 |
Bestarose XL Big Beads IEX | Q Bestarose XL Big Beads |
SP Bestarose XL Big Beads | |
Bestarose BB | SP Bestarose BB/Q Bestarose BB |
疏水作用介质:
疏水作用层析是根据分子表面疏水性差别来分离蛋白质或多肽等生物大分子的一种较为常用的方法。选择疏水作用层析介质的关键在于选择合适的疏水强弱的配基,若蛋白质的疏水性较强就选择较弱的疏水介质,反之亦然,为了增强蛋白质和疏水介质的结合需要再缓冲液中加入一定量的盐(通常是硫酸铵)。若蛋白质本身的疏水性质较强,就不需要加太多的盐,为了提高分辨率可以选择颗粒较小的疏水作用介质。
影响疏水作用的因素:
(1)盐种类及浓度
组成缓冲液中盐的某些离子对蛋白质的构象有稳定作用,如SO42-可提高蛋白质结构的稳定性,是蛋白的溶解度下降,对蛋白有盐析效应,使蛋白同配基间疏水作用增强。还有些离子对于蛋白质构象具有不稳定作用,如Cl-、Ca2+可增加蛋白质的溶解度,这类例子洗脱能力较强。盐析和盐溶的特性可作为选择疏水介质平衡和洗脱条件的依据。
(2)温度
疏水层析过程中,温度升高,生物大分子的构象发生变化,疏水作用增强,有利于提高层析柱额分离度,但对生物活性物质来说,高温条件会使其变性失活,因此疏水层析通常在常温或低温进行,建议在恒温条件下进行疏水层析,避免温度的变化对于层析结果的影响。
(3)pH
疏水层析流动相的pH通常为中性的磷酸盐缓冲液。蛋白质同疏水基团的作用力随pH升高而降低,因为蛋白质的酸性基团随pH升高所带电荷逐渐增多,亲水性增强。但在疏水层析中通常不采用改变溶液的pH来改变蛋白质的疏水性。
产品系列 | 产品系列 |
Diamond 高刚性琼脂糖基架疏水层析介质 |
Diamond Phenyl(HS)/Diamond Phenyl(LS) |
Diamond Octyl | |
Diamond Butyl | |
Diamond Mustang 高分辨率刚性琼脂糖基架疏水层析介质 |
Diamond Phenyl Mustang |
Diamond Octyl Mustang | |
Diamond Butyl Mustang | |
Bestarose FF 快流速琼脂糖基架疏水层析介质 |
Phenyl Bestarose FF (HS)/ Phenyl Bestarose FF (LS) |
Butyl Bestarose 4 FF | |
Octyl Bestarose 4 FF | |
Butyl-S Bestarose FF | |
Bestarose High Performance | Butyl Bestarose HP |
Phenyl Bestarose HP | |
Octyl Bestarose HP |
亲和层析介质:
亲和层析是一种根据生物分子间的特异相互作用来分离物质的层析方法,如酶和底物的结合、受体和配体的结合、抗体和抗原的结合等。这类结合既是特异,又是可逆的。通过这种可逆的结合和分离来达到蛋白纯化的目的。
亲和层析特点:
—高效、快速;高选择性;高分辨率;通常一步纯化就能达到90%以上的纯度;高回收率
亲和介质的组成:
—基架:可以偶联配基的惰性材料,如Bestarose FF、Bestarose HP等;
—连接臂:减少空间位阻效应,大大增加配基与待分离的生物大分子的吸附效率;
—配基:与目标分子有特异性相互作用的物质。
产品系列 | 产品名称 |
耐碱抗体亲和介质 | AT Protein A Diamond / AT Protein Diamond Plus |
抗体亲和介质 | Protein A Diamond / rProtein A Bestarose 4FF |
抗体亲和介质 | Protein G Bestarose 4FF |
核酸亲和介质 | Plasmid Cap Bestarose HP/Plasmid Cap Mustang |
嗜硫亲和介质 | IgM Cap Mustang/IgY Cap Mustang |
IgM Capture Bestarose FF/IgM Capture Bestarose HP | |
IgY Capture Bestarose HP | |
金属螯合亲和介质 | Ni Bestarose HP/Ni Bestarose FF |
苯甲脒亲和介质 | Benzamidine Bestarose 4FF/Benzamidine Bestarose 6B |
谷胱甘肽亲和介质 | GST Bestarose 4FF/GST Bestarose 4B |
蓝胶亲和介质 | Blue Bestarose FF/Blue Bestarose HP |
Diamond Blue/Diamond Blue Mustang | |
肝素亲和介质 | Heparin Bestarose HP/Heparin Bestarose FF |
内毒素亲和介质 | Endotoxin Cap Bestarose 4FF |
金属螯合亲和介质 | IMAC Bestarose HP/IMAC Bestarose FF |
Chelating Bestarose FF | |
预活化亲和介质 | CNBr-activiated Bestarose 4B/CNBr-activiated Bestarose 4FF |
NHS-activiated Bestarose 4FF | |
Epoxy-activiated Bestarose 6B |
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